产品货号：
ALH272
中文名称：
耐热一步法RT-PCR试剂盒
英文名称：
HotScript One-Step RT-PCR Kit
产品规格：
50μl×50次|50μl×100次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒是专为一步法RT-PCR实验配制的，使用该试剂盒能够方便快捷的在同一个反应管内完成逆转录反应和PCR扩增反应。反应过程中无需打开管盖添加试剂，避免了污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。
本试剂盒包括多点突变改造耐热的HotScript M-MuLV反转录酶、热启动Taq DNA聚合酶和RNasin、同时包含适用于反转录和PCR扩增的优化独特反应体系。
HotScript M-MuLV反转录酶的RNase H活性缺失，与M-MuLV相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。同时该酶可以在高达50～60℃反转录，大大提高了复杂二级结构，GC含量丰富模板反转录效率，产量敏感度和特异性比一般试剂盒显著特高。
适用范围：
试剂盒组成：
操作步骤：
2×RT-PCR Buffer低温时可能有结晶析出，应手心加热或者涡旋振荡恢复融解后使用。短期使用可放4℃冰箱。
注意事项：
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本试剂盒包括多点突变改造耐热的HotScript M-MuLV反转录酶、热启动Taq DNA聚合酶和RNasin、同时包含适用于反转录和PCR扩增的优化独特反应体系。
HotScript M-MuLV反转录酶的RNase H活性缺失，与M-MuLV相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。同时该酶可以在高达50～60℃反转录，大大提高了复杂二级结构，GC含量丰富模板反转录效率，产量敏感度和特异性比一般试剂盒显著特高。
适用范围：
- 适用于高拷贝、低拷贝基因检测；
- 适用于高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。
试剂盒组成：
| 组分 | 50μL×50次 | 50μL×100次 |
| 2×RT-PCR Buffer | 625μL | 1250μL |
| Enzyme Mix | 25μL | 50μL |
| HotScript M-MuLV RTase | 25μL | 50μL |
| RNase-free H2O | 1.5mL | 1.5mL |
操作步骤：
2×RT-PCR Buffer低温时可能有结晶析出，应手心加热或者涡旋振荡恢复融解后使用。短期使用可放4℃冰箱。
- 配置反应体系：
成分 用量 终浓度 2×RT-PCR Buffer 25μL 1× Forward Primer（10μm） 1μL 0.2μM Reverse Primer（10μm） 1μL 0.2μM Enzyme Mix 1μL - HotScript M-MuLV RTase 1μL - RNA template X μl 1pg-2μg RNase-free H2O 至50μL -
注意：引物浓度请以终浓度0.2～0.6μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。如果同进行多个反应，先按比例配成混合液，振荡混匀后，按每管50-Xμl (X为模板量)分装。 - 将配制好的反应体系混匀、离心后。
- 将热循环仪预热到50～55℃，将PCR管置于热循环仪中，按以下反应条件进行反应。
步骤 温度 时间 循环数 1 50～55℃ 30分钟 1 2 94℃ 2～5分钟 1 3 94℃ 30秒 30-40 50～60℃ 30秒 72℃ 1～2kb/分钟 4 72℃ 5～10分钟 1 5 4℃ 保温
注意：可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少，扩增量不足；循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
注意事项：
- 避免RNase污染。
- 为保证反应成功建议使用高质量的RNA模板
- 不同的片段，所需最佳RNA模板用量不同，过多的RNA会抑制反应，建议根据反应调整模板用量。
- 不能使用Oligo(dT)和Random Primer合成cDNA。
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